Abstract:
Las Distrofias Musculares de Duchenne y de Becker son desórdenes hereditarios ligados al cromosoma X. Su incidencia a nivel mundial es de 1 cada 3,500 y 30,000 varones nacidos vivos respectivamente. Dos de tres partes de personas con la enfermedad se deben a deleciones en el gen de la proteína distrofina heredadas por la madre. Actualmente en Guatemala no se cuenta con información acerca de la incidencia, ya que su diagnóstico es netamente clínico.
Este estudio tenía como objetivo la optimización de un método para la detección de 12 exones del gen distrofina, relacionados con la distrofia muscular de Duchenne o de Becker, mediante PCR múltiplex. Estos exones corresponden a áreas con altas tasas de mutación. Se estandarizó la amplificación de 11 exones mediante reacciones de PCR heptuplex y cuadruplex, así como 3 reacciones de PCR triplex y una duplex. El exón 3 fue posible amplificarlo únicamente de forma individual.
Asimismo se evaluaron factores que pueden afectar la detección de deleciones mediante estar reacciones, a lo largo de todo el proceso. Se evaluaron dos métodos de extracción, con base a rendimiento, pureza, eficiencia, tiempo y precio de cada uno; se determino que ambos son eficientes para la utilización en esta metodología. Se evaluaron aspectos de la mezcla y programa de cada reacción y la observación de resultados mediante la electroforesis en geles de agarosa al 3%, teñidos con bromuro de etidio.
Con el método estandarizado se realizó la amplificación de muestras de 4 individuos que presentaban síntomas de una de las enfermedades y 6 familiares femeninos de los mismos, para un total de 10 muestras. No se detectaron deleciones en 11 de los 12 exones. Se detectaron deleciones del exón 3 en 2 muestras, una de individuo con síntomas y otra de familiar femenino. Se recomienda la implementación del exón 3 en las reacciones multiplex para su confirmación. A partir de este trabajo se recomienda continuar con el estudio de estas enfermedades en Guatemala. RR
