Implementación y validación de métodos de análisis microbiológico en una industria farmacéutica para la cuantificación de cianocobalamina y ácido fólico en cápsulas.

Abstract

Se implementaron y validaron métodos de análisis microbiológico para la cuantificación de cianocobalamina y ácido fólico en cápsulas. Ambas metodologías se implementaron en un laboratorio farmacéutico. El método de análisis microbiológico para la cuantificación de ácido fólico en cápsulas se lleva a cabo con la cepa bacteriana Enterococcus hirae ATCC 8043, mientras que la cuantificación de cianocobalamina se realiza con la bacteria Lactobacillus delbrueckii ATCC 7830. Ambas cepas fueron monitoreadas para verificar su pureza, la cual se confirmó al observar las características morfológicas de las colonias formadas por cada una, así como por medio de la realización de tinciones de Gram. Se confirmó que E. hirae son cocos Gram positivo, dispuestos en cadenas cortas. No se logró determinar si L. delbrueckii es Gram positivo o Gram negativo, ya que la coloración obtenida en la tinción no coincide con lo reportado en la literatura. Se estableció por medio de un barrido espectrofotométrico, que 550 nm es la longitud de onda más apropiada para realizar las lecturas de %T para cuantificar ácido fólico. Para la cuantificación de cianocobalamina se encontró que la longitud de onda que da mejores resultados es 530 nm. Se descubrió que para el análisis de cianocobalamina, no es necesaria la extracción de ésta a partir de la muestra. Por el contrario, al querer cuantificar ácido fólico en cápsulas, éstas deben ser tratadas con una solución básica en combinación con aumento de temperatura y presión. Fue necesario evaluar 6 parámetros analíticos establecidos por la USP que permitieron la validación de cada uno de los métodos a implementar. Todos los parámetros cumplieron con los criterios de aceptación que cada uno de ellos tiene como base para la validación del método, por lo tanto, se puede decir que los métodos a implementar poseen precisión intermedia, repetibilidad, exactitud, especificidad/selectividad, rango de trabajo adecuado para cada vitamina y linealidad en los sistemas de análisis. Tener todos los parámetros aceptados, se puede decir que los procesos de análisis están validados. Se comprobó que ambos métodos son específicos para cada vitamina analizada; sin embargo, el método de la cianocobalamina no es 100% selectivo para ésta. Al evaluar la estabilidad de la solución madre de ácido fólico, se encontró que ésta se degrada rápidamente si no se le agrega una capa de tolueno, pero también se observó que las muestras preparadas para la cuantificación tanto de cianocobalamina como ácido fólico fueron estables después de un día de elaboración, lo cual se comprobó mediante los resultados obtenidos. Tanto para cianocobalamina como para ácido fólico, se analizaron 6 muestras de cápsulas, cada una de las cuales estaba compuesta por 20 cápsulas aproximadamente. Por medio de la ejecución de cada método, se determinó que la muestra 1 fue la que presentó menor concentración de cianocobalamina (7.298 g/cápsula; 91.225% recuperación), mientras que en la muestra 5 fue donde se evidenció la concentración más baja de ácido fólico (0.797 mg/cápsula; 99.625% recuperación). Se logró establecer el rango de trabajo para la cianocobalamiina, siendo éste de 0.1316-10.2923 ng/mL, mientras que el rango de trabajo calculado para el análisis de ácido fólico fue de 0.0110 a 0.04050 ng/mL. Al observar las curvas estándar de calibración obtenidas para cada vitamina, se determinó que ambos sistemas poseen buena linealidad. Esto lo confirman los valores obtenidos de R2 para cada curva: 0.9910 para ácido fólico y 0.9925 para cianocobalamina. Con base a los resultados obtenidos en cada análisis, se puede decir que se logró implementar y validar ambos métodos de análisis microbiológico, uno destinado a la cuantificación de cianocobalamina y el otro, a la cuantificación de ácido fólico en cápsulas multivitamínicas elaboradas en una industria farmacéutica. xi RR