Validación del método microbiológico en micro placa para la determinación de ácido fólico en alimentos fortificados.

Abstract

Se realizó la validación del método microbiológico en microplaca para el análisis de Ácido Fólico en alimentos fortificados, así como el análisis de estabilidad de esta vitamina en pastas alimenticias fortificadas durante diferentes tiempos de cocción. Previo a la validación se determinó el procedimiento de extracción adecuado para este método. En relación al método de análisis en tubo se introdujo una digestión enzimática con α amilasa. Se estableció que la concentración de inóculo de Enterococcus hirae ATCC 8040 adecuada para el método de análisis microbiológico de Ácido Fólico en microplaca de 96 pozos es de 0.5 μL por cada mL de medio. No es posible preparar el inóculo por lote utilizando glicerina al 15% en solución salina al 0.85%. El periodo de incubación ideal para el método de análisis de Ácido Fólico en microplaca de 96 pozos es de 22 hrs. Además se estableció un límite de detección de 0.0771 OD, un límite de cuantificación de 0.1953 ng/mL y un rango de trabajo de 12.5- 0.1953 ng/mL. En cuanto a la curva de calibración que más se adapta al método de análisis de Ácido Fólico en microplaca de 96 pozos para realizar la cuantificación en las muestras es el parámetro 4. Se analizó el material de referencia VMP-1 con el cual se calculó el porcentaje de recuperación. Con base a esto se obtuvo un porcentaje de recuperación de 102.45%. Se analizaron tres diferentes alimentos para los cuales se estableció su respectiva precisión y repetibilidad. Se obtuvo una variación del 2.73% para harina de trigo, 3.96% para pasta alimenticia y de 2.96% para galleta nutricionalmente mejorada. Por otro lado, a las pastas comerciales fortificadas analizadas se determinó la degradación del Ácido Fólico debido al proceso de cocción. En cuanto al porcentaje de retención se calculó que para la pasta alimenticia “La Moderna” fue de 16.29% después de 12 min. de cocción, 11.08% después de 15 min. de cocción, 9.27% después de 20 min. de cocción y de 6.83 % después de 25 min. de cocción para las muestras lavadas. Para las muestras no lavadas el porcentaje de retención de Ácido Fólico fue de 20.24% después de 12 min. de cocción, 13.30% después de 15 min. de cocción, 11.23% después de 20 min. de cocción y de 9.72 % después de 25 min. de cocción. Para la pasta alimenticia “Sabemas” el porcentaje de retención de Ácido Fólico fue de 44.40% después de 8 min. de cocción, 17.80 % después de 13 min. de cocción, 27.29% después de 18 min. de cocción para las muestras lavadas y de 62.06%, 43.12% y 30.64% para las muestras no lavadas. RR