Diseño y validación de un método analítico para la identificación y cuantificación de clembuterol en músculo bovino.

Abstract

El clembuterol es un fenilaminoetanol, compuesto simpaticomimético que actúa a nivel de los receptores β-2 (receptores β-2 adrenérgicos) utilizado para el tratamiento de enfermedades como asma y EPOC. Es utilizado en ganadería de forma ilegal como anabólico que promueve el crecimiento del músculo, provocando que a los animales a los que se les administra, tengan una gran concentración de clembuterol en tejidos como la carne, pudiendo provocar intoxicación en las personas que consumen la carne presentando sintomatología aguda variada como dolor y tremor muscular, dolores de cabeza y efectos crónicos como alteraciones metabólicas, alteración de tiroides, aumento del tamaño de las células cardiacas, entre otros. En Guatemala, en el Laboratorio de Inocuidad del Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAGA), anteriormente no existía un método para la identificación y cuantificación de clembuterol en carne de bovino. Es por esto que se desarrolló un método lineal con un coeficiente de determinación de 0.9969, preciso, específico y con bajos límites de detección (0.0018 μg/mL) y cuantificación (0.0054 μg/mL) para el análisis de estándares de clembuterol en cromatografía de gases con detector de masas que permitiera detectar y cuantificar clembuterol en un rango de 5.00 μg/mL a 40 μg/mL y derivatizándolo con BSTFA/TMCS utilizando metoprolol tartrato como estándar interno. Para el análisis de muestras de carne se utilizaron tres metodologías de extracción y purificación para la determinación de clembuterol, basadas en la homogenización con buffer acuoso, centrifugación, tratamiento con ácidos y bases fuertes y posterior purificación con columnas de extracción de fase sólida C18 utilizando como acondicionantes de columna metanol y para los lavados buffers de fosfatos a distintos pH para finalmente eluir la muestra con metanol en dos de las metodologías y una mezcla de diclorometano, isopropanol e hidróxido de amonio en otra de las metodologías. Bajo las condiciones utilizadas para el desarrollo de las metodologías antes mencionadas, no se pudo determinar un procedimiento que fuera exacto para la cuantificación de clembuterol en la carne por cromatografía de gases con detector de masas. Por lo que se recomienda, utilizar homogenizador para la homogenización de tejido, probar metodologías que incluyen la digestión enzimática con beta- glucoronidasa y proteasa, y el tratamiento del extracto con pHs superiores a 10 previo a la purificación de columna de fase sólida para poder cuantificar el clembuterol de forma exacta y con porcentajes de recuperación de entre el 85 y 115%.