Validación in vivo de iniciadores para amplificar genes de las familias de citocromo P450 CYP6 y CYP9 en Anopheles albimanus (Wiedemann, 1820).

Abstract

En los últimos años, el control del vector de la malaria ha vuelto a ser importante como resultado de la resistencia a los antimaláricos. Los programas para el control de vectores se basan en la utilización de insecticidas, ya sea rociando casas o utilizando mosquiteros impregnados. Estudios realizados en insectos, indicaron que mutaciones en el sitio blanco y aumento en la actividad de enzimas detoxificantes son algunos de los mecanismos responsables de la resistencia a insecticidas: esterasas, citocromos P450, carboxilesterasas y glutatión s-transferasas. Se ha encontrado que enzimas de las familias de citocromo P450 CYP4, CYP6 y CYP9 se encuentran sobre-expresadas en cepas de mosquitos de An. gambiae, Cx. quinquefasciatus y Ae. aegypti resistentes a piretroides. En Guatemala, An. albimanus es el principal vector de la malaria. Debido a que no se ha secuenciado el genoma de éste, no se han podido establecer los genes involucrados en la resistencia a insecticidas. Estudios bioquímicos revelaron que la resistencia en este vector puede ser mediada por citocromos P450. Por lo tanto, es importante obtener sus secuencias e identificarlos para poder establecer su papel en la resistencia a insecticidas. El objetivo principal de este estudio, fue la validación in vivo de iniciadores degenerados para amplificar genes de las familias de citocromos P450 CYP6 y CYP9 en An. albimanus a partir de ADN genómico. Esto se realizó por amplificación por PCR genómico, clonación de los productos de PCR, secuenciación de los clones, análisis de secuencias y filogenia. Los resultados obtenidos, indican que los iniciadores degenerados publicados por Amenya et al. (2005) permitieron amplificar genes de la subfamilia P y M para la familia CYP6 y subfamilia M y J para la familia CYP9 de citocromo P450 en An. albimanus. También, se estableció que los genes de las familias CYP6 y CYP9 de An. albimanus son ortólogos a los genes de An. gambiae. Por último, se comprobó que los iniciadores degenerados se pueden utilizar para amplificar genes de las familias de citocromo P450 CYP6 y CYP9 en otros vectores de la malaria, como An. albimanus a partir de ADN genómico. RR