Estandarización y validación de la amplificación de los 18 exones del gen LDLR para la implementación de una prueba diagnóstica de detección de riesgo de hipercolesterolemia familiar.

Abstract

La Hipercolesterolemia Familiar (FH) es un trastorno genético de herencia autosómica dominante con una prevalencia de aproximadamente 30 millones de personas en todo el mundo (0.32 %). Se caracteriza principalmente por niveles plasmáticos elevados de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (cLDL) [4], lo que conlleva al desarrollo de placas ateroescleróticas y el riesgo de enfermedades cardiovasculares prematuras [13]. La causa principal de la FH se debe a mutaciones de pérdida de función en el gen receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDLR). Dada la importancia clínica y la alta prevalencia que presenta, la FH se ha convertido en un problema de salud pública. Sin embargo, esta enfermedad aun permanece poco diagnosticada y tratada. A nivel mundial solo el 9% de las personas que la padecen se encuentran diagnosticadas. En América Latina, la prevalencia de FH es gran parte desconocida; específicamente en Guatemala no existen registros. Debido a ello, el objetivo principal de este estudio fue desarrollar un protocolo de diagnóstico genético para la amplificación de los 18 exones del gen LDLR, los cuales están asociados a hipercolesterolemia familiar. Esto se realizó mediante técnicas moleculares de extracción de ADN a partir de muestras de sangre venosa, seguido de una amplificación por PCR de punto final y visualización de productos por electrofresis en gel de agarosa, finalmente una validación por secuenciación de sanger. Fue posible estandarizar la amplificación del gen LDLR e identificar las bandas características de los 18 exones utilizando electroforesis en gel de agarosa. A partir del análisis de secuencias se determinó que las secuencias amplificadas pertenecen al gen LDLR en el cromosoma 19. Así mismo, se detectaron 17 variantes benignas y probablemente benignas en el gen LDLR, 6 de las cuáles corresponden a variantes exónicas sinónimas y 11 a variantes intrónicas previamente reportadas. Finalmente, se recomienda aumentar el número de muestras y analizar pacientes con fenotipos clínicos de FH para evaluar posibles mutaciones patogénicas. (A)