Validación y optimización de un kit comercial para la amplificación de 12 STR del cromosoma X en el laboratorio acreditado ISO 17025 de la fundación de Antropología Forense de Guatemala (FAFG) en la Ciudad de Guatemala.

Abstract

En algunos casos de identificaciones, filiaciones y paternidades y la información disponible no es suficiente para llevar a cabo una coincidencia con ADN por lo que es necesario realizar pruebas adicionales que generen más información. Este trabajo de graduación, por lo tanto, tiene como objetivo principal la estandarización y validación de una metodología para la amplificación de marcadores STRs humanos en muestras de tejidos de evidencia (muestras esqueléticas, sangre, semen y cabello) y referencia (sangre e hisopados bucales) de la Fundación de Antropología Forense de Guatemala, utilizando el kit Investigator Argus X-12. Entre los objetivos específicos de dicha estandarización se encontraba establecer las condiciones óptimas de amplificación y de inyección para las muestras esqueléticas, de evidencia y referenciales. Además de determinar los umbrales de detección, parámetros de análisis y tanto la repetitividad como la reproducibilidad de los resultados obtenidos por medio del kit Investigator Argus X-12. Se determinó que para muestras esqueléticas y de evidencia la amplificación óptima se consigue con un programa de PCR de 27 ciclos y condiciones de inyección de 3kv 10s, 3kv 15s y 3kv 20s. Por otra parte para las muestras de referencia debe utilizarse un programa de PCR de 23 ciclos bajo las mismas condiciones de inyección. Entre otras pruebas realizadas durante la optimización se estableció un rango ideal de concentración para cada tipo de muestras, ya sea fijadas en tarjetas FTA o en extractos de ADN. Se comprobó la repetitividad y reproducibilidad de los resultados en distintos termocicladores para el analizador genético 3130. Además se determinó un umbral de análisis de 20URF para las condiciones de inyección de 3kv 10s, 3kv 15s y 3kv 20s, un umbral estocástico de 140 URF (3kv 10s), 220 URF (3kv 15s) y 300 URF (3kv20s) y un tartamudeo negativo de 8% para este kit. Por último se estableció que hasta en una proporción de 3:1 se obtiene un perfil significativo del contribuyente minoritario en una mezcla. Se recomienda además una evaluación de la reproducibilidad de los resultados en el analizador genético 3130xl, también presente en el Laboratorio de Genética de la Fundación de Antropología Forense de Guatemala. RR