Evaluación y caracterización de bacterias presuntivamente Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis aisladas de semillas y planta de tomate (Solanum lycopersicum) por medio del análisis de la secuencia del gen 16S ADNr y el ensayo de patogenicidad en pilones de tomate.

Abstract

Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis (Cmm) es una bacteria fitopatógena que causa la enfermedad del cáncer bacteriano en el tomate, considerada como una de las más importantes que afectan al tomate a nivel mundial. Actualmente en Guatemala se han reportado brotes de esta enfermedad en campo e invernadero, lo que ha causado pérdidas millonarias a los productores de tomate. Razón por la cual es importante su descripción y caracterización, con la finalidad de contar con métodos confiables de diagnóstico y establecer monitoreos para controlar la diseminación del patógeno. El objetivo de este Trabajo de Graduación fue precisamente evaluar y caracterizar bacterias similares a Cmm aisladas a partir de semillas y planta sintomática de tomate. Para lo cual fue necesario la aplicación de técnicas como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la detección de los plásmidos que le confieren virulencia, pCM1 y pCM2, así mismo fue realizado el análisis de la secuencia del gen 16S ADNr con la cual se identificó a las bacterias. También se introdujo la prueba de la respuesta hipersensible en planta indicadora Mirabilis jalapa, y el uso de las pruebas rápidas inmunostrip dirigido a Cmm, pero quizá el aporte más importante fue la aplicación de los postuladas de Koch desarrollado en un bioensayo para demostrar la presencia de Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis en Guatemala. Se encontró que bacterias similares a Cmm aisladas a partir de semillas de tomate correspondían a los géneros Micrococcus spp y Curtobacterium spp, las cuales son bacterias de suelo consideradas como saprófitas o no fitopatógenas. En cuatro aislamientos de bacterias a partir de planta sintomática se identificó al patógeno Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis y una quinta bacteria se identificó que pertenecía al género Microbacterium spp, también saprofita. Las bacterias de Cmm fueron positivas para las pruebas inmunostrip, PCR y respuesta hipersensible, además mostraron ser cepas virulentas y severas en el bioensayo desarrollado en plántulas de tomate. En tanto, las bacterias Microbacterium spp, Micrococcus spp y Curtobacterium spp, mostraron resultados negativos en las pruebas antes mencionadas, demostrando así la especificidad de las pruebas al discriminar entre miembros de la misma familia y géneros interrelacionados. Con esto se concluye que fue posible el aislamiento y caracterización de Cmm a partir de planta de tomate, no obstante en las semillas se recomienda la incrementación del número de muestra o la utilización de otras metodologías de extracción. La divulgación de los resultados será útil para la ejecución de estudios posteriores que busquen incidencia o cepas distintas de Cmm en Guatemala, en las cuales se podrán aplicar cualquiera de las metodologías descritas en esta investigación. RR