Detección de Candidatus Liberibacter asiaticus en Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae), mediante PCR de punto final, en Guatemala (2013-2014).

Abstract

Huanglongbing (HLB) es una enfermedad que afecta a diversas especies de cítricos; a nivel mundial produce pérdidas monetarias debido a la baja producción de frutos y a la baja calidad de los mismos. El agente causal en Guatemala es la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, la cual es transmitida por el insecto vector Diaphorina citri. Este trabajo tiene como objetivo principal detectar a la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus en el vector mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de punto final. Puesto que esta enfermedad es de difícil manejo, es importante desarrollar métodos para su detección; la detección en el vector provee resultados más puntuales en comparación a la detección en tejido vegetal, en cuanto a presencia de dicha enfermedad. La detección de C. Liberibacter asiaticus en Diaphorina citri fue posible mediante PCR de punto final; en 250 individuos analizados se detectaron 82 casos positivos de HLB, siendo los porcentajes más altos en Santa Rosa (54.17%), Escuintla (46.67%) y Alta Verapaz (45.61%). Se realizó la optimización de dos protocolos de extracción de ADN del insecto, el protocolo de Beard & Scott es el más recomendado en cuanto al promedio de pureza y concentración de ADN obtenidas. Mediante el número de casos de HLB detectados se seleccionó el par de cebadores HLB 1999 como los más adecuados. Se seleccionó la receta de la mezcla de reacción y la temperatura de hibridización óptima para dichos cebadores basado en la calidad del ADN amplificado. A pesar de optimizar el proceso de detección, la intensidad del producto amplificado varía principalmente por la concentración de bacteria que cada insecto puede tener. Se recomienda continuar este estudio aplicando el procedimiento optimizado en este trabajo y analizar más individuos provenientes de varias regiones del país. RR