Detección molecular de la bacteria causante de HLB, Candidatus Liberibacter asiaticus, en el vector Diaphorina citri (Hemiptera: Psyllidae)

Abstract

El agente causal de Huanlongbing (HLB) en Guatemala es la bacteria Candidatus Liberibacter asiaticus, la cual es transmitida por el insecto Diaphorina citri. La enfermedad es muy difícil de diagnosticar, siendo las pruebas moleculares las más confiables en el caso de detección. Se realizaron modificaciones en cuanto a los protocolos y la receta de reactivos de amplificación para obtener un protocolo estandarizado para la detección de casos de HLB en su vector en Guatemala. Se evaluó el protocolo de extracción de ácidos nucleicos descrito por Beard & Scott (2013) y el de Hung y colaboradores (2004). Como método de amplificación, se comparó entre el par de cebadores HLBl 999, propuesto por Hung et a/. (1999) para amplificar una región de ADN genómico de 226 pb de la bacteria y el par de cebadores Olc-OI2c de T exeira et a/. (2005) que amplifican un fragmento de 1160 pb del gen 16S de ARN ribosomal. La enfermedad HLB puede detectarse en el vector con un mayor porcentaje de certeza utilizando los cebadores HLB 1999 (p=0.0068x 10·6) con un intervalo de confianza del 95%. Se analizaron 250 insectos provenientes en diferente proporción, de 8 departamentos de Guatemala; 82 fueron confirmados como casos positivos de HLB. El mayor porcentaje de infección se detectó en Santa Rosa (54.17%), Escuintla (46.67%) y Alta Verapaz (45.61 %). El método de detección de la bacteria en el vector a nivel molecular es confiable y de mediano costo, para ser implementado en las estrategias de vigilancia de la enfermedad HLB en Guatemala.