Generación de plásmido recombinante con potencial para el silenciamiento del gen Mnn1 en individuos de Drosophila melanogaster como un posible modelo de la Neoplasia endocrina múltiple del tipo 1 (MEN1).

Abstract

La neoplasia endocrina múltiple tipo 1 (MEN1) es un síndrome tumoral raro causado por mutaciones puntuales en el gen Men1 que codifica para la menina. La investigación de la menina en el desarrollo de MEN1 es limitado. Actualmente, se han reportado tres organismos modelos dicha enfermedad: pez cebra, murinos y Drosophila melanogaster. Se ha determinado que el gen Men1 humano contiene una alta ortología con el gen Mnn1 de D. melanogaster, siendo un excelente modelo para la enfermedad. El objetivo del estudio fue la generación de plásmido recombinante pCR2.1-TOPO-Mnn1 con el potencial de silenciamiento del gen Mnn1 en D. melanogaster como un organismo modelo de MEN1. Para ello, se llevó a cabo el aislamiento de ARN de individuos adultos machos y hembras de la mosca, seguido de la síntesis de ADN complementario (ADNc). La amplificación del gen Mnn1, con la secuencia del promotor T7 en ambos sentidos, fue alcanzada con dos métodos distintos: PCR convencional y PCR anidado. Seguidamente, se realizó la inserción del fragmento del gen Mnn1 en el vector plasmídico, pCR2.1™-TOPO® y fue visualizado en un gel de agarosa. En conjunto, los resultados demostraron que se alcanzó la producción exitosa de un plásmido recombinante con el potencial de silencimiento del gen Mnn1 en individuos adultos de D. melanogaster. En futuras investigaciones se recomienda la generación de distintos fragmentos del gen Mnn1 para evaluar la eficiencia de silenciamiento en experimentos in vivo. También, la optimización de PCR para alcanzar una amplificación reproducible para el fragmento del gen diana. (A)