Análisis de cepas presuntivas de Bacillus thuringiensis aisladas de la filosfera del árbol de aguacate utilizando oligonucleótidos diseñados para amplificar genes cry.

Abstract

Bacillus thuringiensis (Bt) es una bacteria Gram positiva con la habilidad de iniciar un proceso de esporulación en condiciones de desarrollo adversas. Las esporas de la bacteria tienen una actividad entomopatogénica sobre insectos de determinada orden y familia, siendo distintas cepas más tóxicas que otras en ciertos insectos. Esto se debe a la síntesis de proteínas con actividad tóxica, durante la esporulación, denominadas Cry y Cyt. El objetivo principal del estudio era el de realizar un análisis de cepas presuntivas seleccionadas de B. thuringiensis aisladas de la filosfera del árbol de aguacate para la presencia de genes cry. Entre los específicos se encontraban clonar los fragmentos obtenidos de la amplificación por PCR, analizar el patrón de proteínas y plásmidos de las distintas cepas seleccionadas. El estudio consistió en una amplificación por PCR utilizando los oligonucleótidos anteriormente mencionados en seis diferentes cepas. Luego, se clonaron los fragmentos amplificados utilizando un vector de clonación que fue electroporado a células E. coli. Las células que presentaban insertos de distinto tamaño fueron cultivadas y se les realizó una extracción de plásmidos los cuales fueron posteriormente secuenciados. Además, se separaron las proteínas de las distintas cepas por un SDS-PAGE y se realizó una separación por electroforesis en gel de agarosa de los plásmidos extraídos de las distintas cepas. Las secuencias obtenidas de diferentes cepas mostraban alta similitud con secuencias de genes que codifican una subunidad de la ADN polimerasa III y alcohol deshidrogenasa de varias especies del género Bacillus. Se realizó un análisis filogenético utilizando estas secuencias y se determinó la relación evolutiva de las cepas analizadas con respecto a otras especies del género Bacillus. Además, una de las secuencias obtenidas demostraba alta similitud con la del plásmido pALH1, únicamente reportado B. thuringiensis Al Hakam. La identificación de genes cry de las cepas no se pudo realizar debido a que los genes no fueron amplificaron con los cebadores y condiciones utilizadas para el PCR. RR