Validación in silico de iniciadores para la amplificación de genes de las familias de citocromo P450 CYP6 y CYP9 en Anopheles albimanus.

Abstract

La resistencia a insecticidas en Anofelinos y otros vectores es un obstáculo para el control de enfermedades como la malaria en Guatemala. Debido a esto, es necesario contar con herramientas que permitan entender los mecanismos de resistencia a nivel molecular y poder detectarla en poblaciones del campo. Uno de los mecanismos de resistencia más común en cepas resistentes a insecticidas, es la detoxificación por medio de las enzimas citocromo P450. En Guatemala, el principal vector de la malaria es Anopheles albimanus. Actualmente no se ha secuenciado el genoma de este mosquito por lo que se desconocen muchos genes, entre estos los miembros de la familia de los citocromo P450. Debido a que estos genes pueden impartir un mecanismo de resistencia, es importante identificarlos para poder analizar el papel que cumplen en la resistencia a insecticidas de A. albimanus en Guatemala. El objetivo de este trabajo fue la validación in silico de iniciadores reportados en la literatura para la amplificación del ARNm de genes de las familias Citocromo P450 6 (CYP6) y 9 (CYP9) en A. albimanus. Esto se logró realizando alineaciones de secuencias de proteínas y mARN de citocromos P450 de diferentes insectos, en programas de bioinformática tales como BLAST y ClustalW. Los resultados indican que los iniciadores degenerados propuestos por Amenya, et.al., 2005 para amplificar genes de las familias CYP6 y CYP9 se pueden utilizar en A. albimanus. Los alineamientos en ClustalW mostraron que los iniciadores fueron diseñados a partir de regiones altamente conservadas en diferentes insectos lo cual sugiere que estas regiones también se encuentran conservadas en A. albimanus. Se rediseñó el iniciador CYP9 R para que se pueda utilizar para amplificar CYP9 con diferentes secuencias ya que el propuesto por Amenya, et.al., 2005 tiene una región que no se une a varias secuencias de CYP9. De los iniciadores específicos solamente el CYP6AA4 y CYP6P3 forward pueden amplificar genes homólogos directos de CYP6 de otras especies de Anopehlinos además de la que son específicos; sin embargo los iniciadores reversos de ambos CYP6 no pueden amplificar en otras especies, por lo que no se recomienda utilizar estos iniciadores para amplificar genes CYP6 en A. albimanus Los resultados obtenidos a partir de este trabajo, se podrán utilizar en un futuro, para obtener secuencias de los genes de las familias CYP6 y CYP9 en A. albimanus, generando información necesaria para el análisis del papel de estas familias en la resistencia a insecticidas. RR