Aislamiento de bacterias Gram-positivo a partir de tejido vegetal de tomate (Solanum lycopersicum) y su identificación mediante técnicas microbiológicas clásicas y técnicas moleculares.

Abstract

Las técnicas moleculares para estudio e identificación de bacterias están altamente desarrolladas para las bacterias tipo Gram-negativas. Sin embargo, dichas técnicas no funcionan en bacterias Gram-positivas. Las técnicas microbiológicas convencionales no son lo suficientemente específicas para la identificación de estas bacterias, es por ello, que las técnicas de extracción y amplificación de genes en Gram-positivas son foco actual de investigación. Adicionalmente, varias bacterias Gram-positivas son patógenas de plantas, siendo la más importante Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis quecausa de la marchitez bacteriana del tomate. Esta enfermedad fue reportada en Guatemala en octubre del año 2009, cuando se reportó como causa grandes pérdidas para los agricultores de tomate de invernadero. Actualmente, a nivel mundial, no existe una manera eficiente y rápida de detección de dicha bacteria, ni mucho menos un tratamiento o alguna variedad de tomate resistente a ella. Los síntomas asociados a C. michiganensis subsp michiganensis incluyen marchitamiento, presencia de frutos con llagas, degradación de las paredes de los haces vasculares y la muerte del tomate. De acuerdo con la EPPO (2006), esta bacteria está categorizada como cuarentenada debido a su alta virulencia, ya que es capaz de transmitirse mediante cortes en la planta, heridas e incluso existen reportes de infección facilitada en estomas. La virulencia de esta enfermedad es debido a la presencia de dos plásmidos (pCM1 y pCM2) portadores de factores de virulencia, siendo en pCM1 una endonucleasa y en pCM2 la región pat-1. Estos plásmidos pueden ser transmitidos a otras cepas, y actualmente se estudia la posibilidad de su transmisión a diferentes especies. Es por ello, y sumado a las pérdidas en el cultivo de tomate, que este trabajo tiene como objetivo la identificación de bacterias Gram-positivo presentes en tejido de tomate, con especial énfasis en C. michiganensis subsp. michiganensis; seguido por la innovación de un método de diagnóstico que integre las técnicas de microbiología convencional, biología molecular y de bioinformática para poder proveer a los agricultores de un método de diagnóstico eficiente, confiable, riguroso y accesible. RR