Análisis del perfil de expresión del gen Mnn1 de Drosophila melanogaster en sus etapas de desarrollo.

Abstract

La neoplasia endocrina múltiple de tipo 1 (MEN-1) es una enfermedad que puede dar lugar a la formación de cáncer en células y tejidos del sistema endocrino (Khatami y Tavagnar, 2018); afectando a 1 de cada 30,000 personas (Thakker y cols., 2012). El gen Mnn1 de Drosophila melanogaster es ortólogo al gen MEN1 de humanos (Marini y cols., 2006), por lo que el análisis de la expresión del gen podría ayudarnos a generar un modelo animal de esta condición. Para ello se realizó un aislamiento de ARN, seguido de la síntesis de ADNc, para finalizar con una amplificación del gen Mnn1 por medio de una reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) con cebadores específicos para el gen. Se pudo identificar que los adultos hembras y las larvas en estadio 3 presentan la mayor concentración y pureza de ARN aislado, mientras que las pupas y larvas de instar 1 presentan valores por debajo del estándar para la proporción A260/230. Mientras que en la síntesis de ADNc todos los grupos de muestras obtuvieron concentraciones dentro del rango esperado y purezas aceptables. Los individuos de las distintas etapas de desarrollo de D. melanogaster presentan expresión del gen Mnn1. De los cuales, los grupos que obtuvieron mayor resultado de expresión relativa fueron los adultos de ambos sexos, larvas de instar 1 y 2; siendo la expresión de adultos diecinueve veces mayor a la de pupas (con un rango de expresión relativa que abarca desde 3.24 hasta 200). Adicionalmente, el constructo diseñado permitirá la generación de una secuencia de ARNdh de 347 pb que al ser administrada en el organismo dará lugar al silenciamiento de cualquier isoforma del gen Mnn1; al igual que las secuencias de siARN planteadas. (A)