Estandarización de un método de detección de Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV) por medio de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcripción inversa (RT-qPCR) mediante de sondas TaqMan®.

Abstract

El Tomato brown rugose fruit virus (ToBRFV por sus siglas en inglés), o el virus de la Fruta Rugosa Marrón del Tomate, es una amenaza relativamente nueva para los cultivos de tomate y chile pimiento a nivel mundial, principalmente, ya que no se ha reportado resistencia ante el mismo. Debido a su rápida diseminación por Europa y llegada al continente americano es necesario un método rápido de detección en productos comerciales para evitar la infección y consecuente pérdida total de los cultivos anteriormente mencionados a nivel nacional. La reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcriptasa inversa (RT-qPCR) presenta una metodología viable para realizar un diagnóstico rápido de cualquier fuente vegetal del virus. La presente muestra una estandarización de la metodología para la detección del virus partiendo desde la comparación de dos métodos de extracción de ARN utilizando como muestra semillas de tomate y chile pimiento, y la optimización de condiciones de la RT-qPCR. Se estableció que el método de extracción de ARN con CTAB provee mejores resultados en términos de concentración y pureza. Se validaron los cebadores y sondas utilizados para detectar genes de la proteína de movimiento MP, cápside CP y un control interno de extracción de Sugarcane Mosaic Virus (SCMV por sus siglas en inglés). (A)