Producción de ARNdh de la región específica femenina del gen doublesex como blanco para eliminar hembras de Anopheles albimanus, principal vector de la malaria en Centroamérica.

Abstract

La malaria es una enfermedad febril aguda ocasionada por el parásito Plasmodium y transmitida por picaduras de mosquitos del género Anopheles. Una de las principales formas de abordar el problema es mediante el control del vector. Es importante buscar nuevas estrategias de control, como lo es la técnica del insecto estéril (SIT, por sus siglas en inglés). La técnica del insecto estéril consiste en separar ambos sexos de los insectos, esterilizar a los machos y luego liberarlos en focos de transmisión. Como resultado, se disminuye la población general del vector en el área. Sin embargo, el primer paso de la técnica es un paso limitante: no hay una forma eficiente de separar a las hembras de los machos. Una estrategia que se ha empleado en otros insectos para superar esta barrera es el silenciamiento de genes de determinación sexual que tengan una forma específica femenina, como lo es el gen doublesex (dsx). En otros mosquitos se ha demostrado que existen dos isoformas específicas de hembra para dicho gen. Por ello, el presente estudio buscaba apoyar la producción de machos de A. albimanus estériles identificando un fragmento específico femenino del gen dsx, que pueda ser silenciado y empleado para eliminar a las hembras mediante la técnica de ARN de interferencia (ARNi). Para realizarla, se emplea ARN de doble hebra (ARNdh) específica del gen de interés. Se clonó y produjo ARNdh específico para una región compartida entre las dos isoformas femeninas del gen dsx en Anopheles albimanus. Fue posible identificar una región específica de hembras de 656 pb dentro de la región común de las isoformas femeninas del gen, clonarla en bacterias Escherichia coli XL1 Blue y verificar que la secuencia del fragmento específico correspondiera a dsx. Posteriormente, se logró generar una bacteria Escherichia coli HT115 (DE3) con el inserto de dsx, y se verificó con éxito que fuese capaz de producir ARNdh del fragmento de 656pb para silenciar el gen. Se obtuvo una concentración de ARNdh menor a 3 ng/L. Por otro lado, se diseñaron cebadores para PCR cuantitativa específicos para cada una de las isoformas femeninas del gen dsx. De esta forma, se podría realizar una cuantificación de la expresión de cada isoforma antes y después de silenciar el gen. En la siguiente fase, se evaluará el potencial del silenciamiento de dsx en A. albimanus para la eliminación de hembras en una población.