Detección del virus TSWV por medio de la técnica molecular RT-PCR en Chrysanthemum spp. provenientes del municipio de San Juan Sacatepéquez, Guatemala.

Abstract

Desde su aparición en 1915 el virus del bronceado del tomate (Tomato spotted wilt virus, TSWV por sus siglas en inglés) ha causado varias pérdidas en cultivos como lechuga, tomate y flores ornamentales, entre un gran rango de hospederos que tiene este virus. En Guatemala el crisantemo es uno de los cultivos con mayor importancia económica, siendo el municipio de San Juan Sacatepéquez uno de los mayores productores al contar con más de 500 invernaderos de plantas de corte. En los últimos años este cultivo se ha visto afectado por varios patógenos, por lo que se han iniciado estudios para determinar su identidad. Utilizando la técnica de ELISA, diagnóstico realizado en el Laboratorio de Protección Vegetal de la Universidad del Valle de Guatemala, se ha detectado la presencia del virus TSWV en las plantaciones de San Juan Sacatepéquez. Este trabajo tiene por objetivo la implementación de la técnica molecular RT-PCR como prueba de diagnóstico capaz de detectar el genoma del virus TSWV en extractos de tejido vegetal del crisantemo. Además, busca verificar la confiabilidad de la técnica de ELISA, prueba de referencia utilizado dentro del Laboratorio de Protección Vegetal de la Universidad del Valle de Guatemala, para la detección de este virus. Durante el proceso de estandarización se observó que el paso determinante para lograr la detección del virus es el método de extracción de su genoma. El método que mostró ser más sensible es el sugerido por Locali et al. (2003). De igual forma, la manipulación de las muestras es importante para no degradar el ARN viral ya que es muy susceptible. Se determinaron los parámetros de sensibilidad y especificidad de la prueba de ELISA utilizando veinte muestras de crisantemo colectadas en el municipio de San Juan Sacatepéquez. La determinación se realizó empleando la Curva ROC utilizando los resultados generados por la prueba de ELISA y por la técnica de RT-PCR estandarizada. Se determinó que la técnica de ELISA es aceptable en términos de especificidad (85.0%) pero no así en términos de sensibilidad (62.5%). Esto sugiere que la técnica genera resultados positivos confiables; sin embargo, podrían generarse resultados falsos negativos. Con base en esto es necesario establecer una secuencia de trabajo que se inicie realizando la detección del virus con la prueba de ELISA y luego por la técnica de RT-PCR, con especial enfoque en las muestras con resultado negativo por ELISA. Se recomienda que los resultados obtenidos por este estudio exploratorio sean empleados con criterio, y en un futuro se dé continuidad al proyecto considerando las recomendaciones planteadas en este trabajo. RR