Validación de dos protocolos de clonación génica para el aislamiento de fragmentos de ADN relacionados a la resistencia al glifosato y tetraciclina proveniente de bacterias aisladas de muestras de suelos guatemaltecos.

Abstract

El glifosato es un herbicida de amplio espectro utilizado para tratar malezas en los diferentes cultivos agronómicos. El mismo, inhibe la enzima enolpiruvil shikimato 3- fosfato sintasa, EPSPS por sus siglas en inglés. Por ser un herbicida de baja toxicidad y de excelente funcionamiento, es el herbicida de mayor demanda a nivel mundial. Gracias a herramientas genéticas, se ha podido producir cultivos transgénicos resistentes al glifosato, permitiendo la aplicación de glifosato a campos agrícolas para remover las malezas sin dañar al cultivo de interés. El objetivo de este estudio fue el aislamiento de un gen responsable de la resistencia al glifosato por medio de la implementación de dos protocolos de clonación génica y la clonación de un gen de resistencia al antibiótico tetraciclina por uno de los métodos. Para esto se utilizó una cepa Serratia marcescens resistente a 75 mM glifosato y también resistente a 1.2 μM tetraciclina, nombrada como Mx3 (Richter 2011). Para el aislamiento del gen, se utilizaron dos protocolos de clonación génica: método de biblioteca genómica y método de cebadores degenerados. Se logró la clonación de un elemento que confiere resistencia a tetraciclina por el método de biblioteca genómica utilizando la enzima PstI para la digestión parcial de ADN. Se logró la clonación parcial del elemento que confería resistencia a glifosato, por el método de biblioteca genómica utilizando también la enzima PstI para generarla. Las secuencias parciales de los elementos que confieren resistencia no permiten concluir sobre la identidad del inserto que confiere resistencia al glifosato, por lo que se debe repetir, pero sí permitieron identificar un posible transportador que puede ser responsable de la resistencia a la tetraciclina. RR