Evaluación de métodos para inducir interferencia de ARN por medio de ARN de doble hebra en la expresión del gen RHBP (Rhodnius Heme-Binding Protein) en ninfas de Rhodnius prolixus Stahl 1859, vector de la enfermedad de Chagas.

Abstract

El objetivo de este estudio fue evaluar dos métodos para inducir interferencia de ARN por medio de ARN de doble hebra en la expresión del gen RHBP (Rhodnius Heme Binding Protein) en ninfas de R. prolixus Stahl 1859, vector de la enfermedad de Chagas. Para esto se realizaron dos ensayos mediante la inoculación por vía oral (ingesta) (el ARNdh se agregaba a la sangre) dividido en dos experimentos: cuantificación de proteína en hemolinfa y efectos de muda; y la inoculación directa (inyección) (el ARNdh se inyectaba en el pronoto) la cual se realizaba 24 horas antes de alimentar a los individuos con sangre. Se empleó un total de 150 individuos para el ensayo de ingesta: 120 en el experimento de análisis del HPLC y 30 en el experimento efectos de muda. Se utilizo 60 individuos para el ensayo de inyección. Cada ensayo constó de 3 tratamientos (Sangre sin ARNdh, Control ARNdh y ARNdh RHBP), en los cuales se evaluó la ingesta sanguínea, la dosis de sangre consumida, la acumulación de proteína en la hemolinfa (experimento análisis HPLC e inyección) y el retraso de muda (experimento efectos de muda). La técnica de HPLC descrita en esta investigación fue eficiente para detectar cambios en la concentración de la proteína RHBP en muestras de hemolinfa saturada y mantener una buena reproducibilidad entre días de análisis. Se determinó que el mejor control para observar los efectos fisiológicos del ARNdh RHBP es el Control ARNdh, dado que los tratamientos con ARNdh presentan una cinética de acumulación de proteína similar entre ambos. La cinética de acumulación de proteína en la hemolinfa se ve alterada por el ARNdh en la sangre, causando una mayor cantidad de RHBP en el día tres (d3) por parte de los individuos de ambos ensayos. Se concluyó que existe una diferencia significativa en la cantidad de proteína circulante para el tratamiento de Sangre sin ARNdh en los ensayos de ingesta e inyección del d3. Esto sugiere que la proteína RHBP está involucrada en la actividad inmune de R. prolixus. RR